作业帮醋酸纤维薄膜电泳 可否用于牛血清,猪血清 鸡血清的分离 应用关键是什么
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/27 21:04:53
醋酸纤维薄膜电泳 可否用于牛血清,猪血清 鸡血清的分离 应用关键是什么
醋酸纤维薄膜电泳 可否用于牛血清,猪血清 鸡血清的分离 应用关键是什么
醋酸纤维薄膜电泳 可否用于牛血清,猪血清 鸡血清的分离 应用关键是什么
醋酸纤维素薄膜本身就像包装药片的铝塑纸一样,它是由一层薄薄的聚乙烯和压附在其上的醋酸纤维素酯构成的.光滑一面是聚乙烯一面,唯有粗糙面是醋酸纤维素酯的一侧.所以自然要点在粗糙面上了.
①电泳后区带界限清晰；②通电时间较短（二十分钟至一小时）；③它 对各种蛋白质（包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶）都几乎完全不吸附,因此无 拖尾现象；④对染料也没有吸附,因此不结合的染料能完全洗掉,无样品处几乎完全 无色.它的电渗作用虽高但很均一,不影响样品的分离效果,由于醋酸纤维素薄膜吸 水量较低,因此必需在密闭的容器中进行电泳,并使用较低有电流避免蒸发.
尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电 泳低,但它具有简单,快速等优点.
醋酸纤维膜电泳是一项简便而又迅速的方法.它的优点是：①电泳区带分离清楚,比琼脂平板电泳分辨率高；②可以定量；③样品用量少,只需要几微升即可.
（一）材料与试剂
1．pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液
2．0.5％氨基黑染色液
3．透明液：
冰醋酸 3 份
95％乙醇 2 份
混合即可
4．醋酸纤维膜 \x1d
（二）操作方法
1．将醋酸纤维膜条浸于巴比妥缓冲液中,浸透后用竹镊子夹到滤纸上,吸去过多的水分.将膜的光滑面向下搭在电泳槽两侧的滤纸桥上,注意搭平.
2．加样 用微量加样器于负极端1.5cm处加样1µl～3µl,注意样品要成一条直线且垂直方向.也可用血球计数板盖玻片蘸取样品轻轻点上.
3．电泳 电压10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm电泳45min～60min,至电泳区带展开约2.5cm～3.5cm时,关闭电源.
4．染色 将膜浸于氨基黑染色液中,染色数分钟.
5．透明 将染色的醋酸纤维膜浸于透明液中,漂洗5min 10min,至背景呈乳白色为止.为了防止膜上出现许多气泡,可以逐渐升高透明液浓度10％、20％以至30％.
6．结果观察及保存 透明后,将膜贴于玻璃上,干后取下,即可观察结果并保存.
7．定量 将各区带剪下,分别浸于4Mol/L NaOH 4ml中,振摇数次,约2h,色泽被浸出,于580nm～620nm比色,测出各区带的OD值.同时剪一块大小相似无蛋白的透明膜同样处理,做为对照.
计算各区带蛋白含量百分比（以血清为例）
总OD值T＝A+α1+α2+β+γ
白蛋白％=A/T×100％
以此类推.
（三）注意事项
1．醋酸纤维膜孔隙小,含水量少,且较薄,因此它对热很敏感,故应注意控制电压、电流.
2．样品不可过多,只需几微升即可.
3．加样一定要呈直线、垂直、分布均匀,这样泳动的区带整齐、不歪.
4．注意醋酸纤维膜的质量,浸泡很久仍有大块白色硬点者可弃之不用.